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    CRM-AZA1原多甲藻酸毒素-1(NRC標準品)的制備及分析

    東莞市百順生物科技有限公司

    CRM-AZA1原多甲藻酸毒素-1(NRC標準品)是從2005年愛爾蘭多尼戈爾郡布魯克斯收集的貝類組織中分離出來的。AZA1的制備提取和純化在伊利蘭海洋研究所進行,最終清潔和純度檢查在哈利法克斯國家研究委員會進行。AZA1的結(jié)構(gòu)和純度由NMR和LC-MSIMS證實。未檢測到明顯雜質(zhì)。使用高分辨率MS,AZA1的[M+H]*測得準確質(zhì)量為842.5037+/-0.0004(對于C.H-pNO12,A=-1.5 ppm)。圖1顯示了高分辨率MS產(chǎn)物離子光譜。


    通過將純AZA1溶解在CD中制備儲備溶液;OH用于定量核磁共振。通過在脫氣的高純度甲醇中精確稀釋qNMR儲備溶液來制備CRM溶液。該溶液與聚四氟乙烯攪拌棒和磁力混合器充分混合,同時在氬氣氛下的冰浴中冷卻。等分樣品被分配到干凈的氬氣弗萊達姆玻璃安瓿中,然后立即用火焰密封。


    CRM-AZA1原多甲藻酸毒素-1(NRC標準品)的認證值基于NRC使用兩種獨立方法獲得的結(jié)果:使用高純度咖啡因標準對AZA1儲備溶液進行外部校準的定量核磁共振波譜[7],以及使用中性pH流動相的LC-MS/MS,使用CRM-AQA1(批號20060719)進行校準。值得注意的是,CRM-AZA1-b的認證值是AZA1和差向異構(gòu)體37-epi-AZA1濃度的總和[8]。用中性流動相柱系統(tǒng)(如圖2A所示)從AZA1中分離出差向異構(gòu)體,但用一些更常用的流動相柱體系(如圖2B所示),化合物可能無法分離。根據(jù)之前進行的研究,當結(jié)合AZA1和37-epi-AZA1的峰面積時,假設(shè)了等摩爾響應(yīng)因子[8]。37-epi-AZA1峰面積約相當于AZA1和37-epi_AZA1總峰面積的3.5%。

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    同質(zhì)性

    從整個系列中選擇了具有代表性的CRM-AZA1-b安瓿(n=21)。通過LC-MSIMS測定,觀察到良好的均勻性。AZA1(0.8%)的瓶間均勻性引起的相對不確定度被計算出來,并用于最終的組合不確定度。


    不確定性

    考慮并量化了與CRM-AZA1-b表征相關(guān)的所有合理誤差源。包括與所用兩種分析方法相關(guān)的組合不確定度分量(Jchar)。總體不確定度估計值(UcR)包括與批次特性(Jchar)、瓶間變化(Lhom)和長期儲存期間的不穩(wěn)定性(Jsab)相關(guān)的不確定度[9]。表2中列出了這些成分,并按以下方式組合和擴展:

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