ERM-DA470k_IFCC血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備

ERM-DA470k_IFCC血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的起始材料是從健康獻(xiàn)血者的血液中制備的血清，在 6 個(gè)不同的血液采集中心采集。

捐獻(xiàn)者的選擇：臨床診斷為糖尿病、黃疸、高血壓、心肺腎病的捐獻(xiàn)者、孕婦和優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員除外。高膽固醇或甘油三酯濃度的樣品被拒絕。來(lái)自患有肝炎和人類免疫缺陷病毒 (HIV) 感染的受試者以及有細(xì)菌感染臨床證據(jù)的捐贈(zèng)者的捐贈(zèng)被排除在外。

血清采集方案：從每個(gè)獻(xiàn)血者身上抽取 400 – 500 mL 全血，預(yù)計(jì)平均血清體積為 180 mL（140 – 220 mL）。對(duì)于來(lái)自日本的獻(xiàn)血者，抽取的血液量在 200 到 300 毫升之間。

以下方案用于制備血清：

a) 餐前血（使用止血帶）（德國(guó)采集的血不是嚴(yán)格的餐前血，但對(duì)血清的透明度做了非常嚴(yán)格的選擇）。

b) 收集到干燥袋或聚合物瓶中，不含任何添加劑或抗凝劑（如 Baxter、Fenwal）

c) 在室溫下凝固 3 - 4 小時(shí)

d) 將袋子在離心桶或瓶子中以 2200 g 離心 20 分鐘

e) 從凝塊中分離血清

f) 在 -70 和 -80 °C 之間冷凍血清

g) 在干冰上將血清運(yùn)送到 IRMM，儲(chǔ)存在 -70 °C。捷克共和國(guó)生產(chǎn)的血清在用干冰運(yùn)輸之前在 -30 °C 下短暫儲(chǔ)存

血清檢測(cè)：血庫(kù)檢測(cè)血清中的 HIV 1+2、HBV 或 HBsAg 以及 HCV。通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)單克隆丙種球蛋白病。由于存在單克隆成分，有 6 份捐獻(xiàn)被丟棄，10 份捐獻(xiàn)因?yàn)轭愶L(fēng)濕因子 (RF) 濃度高于 30 IU/mL 被丟棄（表 1）。 390 份捐獻(xiàn)，其中 96 份來(lái)自女性捐獻(xiàn)者，符合納入標(biāo)準(zhǔn)，已獲準(zhǔn)進(jìn)一步處理。

表 1：收集血清的摘要信息。如果必須排除某些捐贈(zèng)，括號(hào)中的數(shù)字表示有多少男性和女性捐贈(zèng)符合納入標(biāo)準(zhǔn)。

處理過(guò)程總結(jié)在圖 1 中。它主要遵循用于 CRM 470 (ERM-DA470) [2] 的過(guò)程。 主要區(qū)別在于，在脫脂步驟之后，使用截止值為 10 kDa 的透析膜代替 12-14 kDa，在匯集個(gè)體捐贈(zèng)物之前未將疊氮化鈉添加到血清中，并且最終疊氮化鈉質(zhì)量濃度保持在 1 g/L 以下。

將來(lái)自每個(gè)采集中心的血清匯集起來(lái)，作為采集中心池進(jìn)行處理，以去除顆粒物和脂質(zhì)，并達(dá)到血清“成熟”程度的統(tǒng)一。 由于日本的批次較小，因此與意大利的血清一起加工。 然后匯集來(lái)自不同采集中心的血清，在添加防腐劑（疊氮化鈉、抑肽酶和苯甲脒鹽酸鹽）后、灌裝和凍干前進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。

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